ПЦР гепатита С

Гепатит С — это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Для определения болезни используют метод ПЦР гепатита С. Это новая высокотехнологичная методика, что позволяет исследовать генетический материал на существование жизни в мельчайших частицах (молекулах) и наименьших количествах. Вирус гепатита очень стойкий, он способен долго жить в окружающей среде и отлично приживается в организме человека.

Что такое ПЦР?

Нынче существует огромное количество самых различных болезней. И не меньшее число методов их определения. Так как агенты инфекций научились с легкостью приживаться в окружающей среде и эволюционировать, то чтобы их диагностировать, применяются новейшие технологии. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце. О нем часто пишут: ищет иглу в стогу сена, а потом из игл строит стог.

Виды метода ПЦР

Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование. Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти. Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

Особенности количественного ПЦР анализа

Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения. Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

Показания

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

• определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;
• качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;
• нахождение острого и хронического гепатита С;
• существование микст-гепатитов;
• при планировании лечения;
• если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

Также смотрят, какая вирусная нагрузка при гепатите: низкая — терапия проводится успешно; повышенная — лечение не эффективно и его нужно менять.

Для чего проводится на различных этапах течения болезни?

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии. Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

Расшифровка

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Норма количественного анализа на гепатит С

Когда человек здоров, норма есть — «не обнаружено». У заболевших людей нормой будет снижение дозы вируса в результатах на логарифмическую единицу, что проявляется убыванием числа нулей в анализе на один (например, с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл). Рамки диапазона концентрации вируса, что определяет амплификатор, находятся в границах 1,8*102 — 2,4*107 МЕ/мл. Трактовка исхода:

• низкая концентрация — от 600 МЕ/мл до 3*104 МЕ/мл;
• средняя — от 3*104 МЕ/мл до 8*105 МЕ/мл;
• высокая — выше 8*105 МЕ/мл.

Отклонения

При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса. На получение недостоверного результата могут повлиять отдельные факторы, например, загрязнение образцов; присутствие в крови гепарина и веществ, замедляющих действие компонентов ПЦР; ошибки лабораторий; несоблюдение правил проведения теста.

Также результат в нескольких лабораториях может различаться, возможно, была другая методика проведения исследований. Чтобы узнать, насколько поражена печень и опасность болезни, недостаточно провести количественный ПЦР гепатита. Дополнительно проходят биохимические процедуры и биопсию.

Планируя лечение, проводят генотипирование вируса. В связи с тем, что гепатит С способен изменяться, существует несколько групп. Для разных типов лечение может отличаться. Бывают ситуации, когда присутствует несколько видов, но анализ находит один, тот, что преобладает. Тогда тест пересдают.

Плюсы метода

Методика ПЦР дает возможность дать заключение и назначить правильное лечение. Плюсы методики:

• Быстрота результатов — не требует разграничения и выращивания видов возбудителя. Автоматизация процесса позволяет обрабатывать и изучать материал с получением результата за 4−5 часов.
• Прямота определения возбудителя — найдя особую часть ДНК, прямо указывает на наличие недуга. Например, ИФА — находит белки-маркеры (продукты жизнедеятельности бактерий), что не дает точного подтверждения наличия болезни.
• Специфичность — исследуется вещество, характерное только для конкретного возбудителя, что исключает реакцию на ложные совместно-реагирующие агенты.
• Восприимчивость — может обнаружить самое малое количество вируОписание итогаса.
• Универсальность — основывается на нахождении фрагментов ДНК или РНК конкретных организмов. Это дает возможность провести диагностику для любых агентов из одного биоматериала, если другие методы бессильны.
• Выявляет не только явные, но и скрытые инфекции — эффективен для изучения агентов трудно выращиваемых, не выращиваемых, стойких.
• https://www.youtube.com/watch?v=lBi-d6jAKxQ

Посредством этого исследования провести диагностику могут каждому для удостоверения факта отсутствия болезни. Но для достоверных фактов нужно четко соблюдать инструкции. ПЦР используют в разных отраслях: криминалистике, для установления отцовства, для диагностирования различных вирусов, для выявления аллергии на лекарства, клонировании генов, мутагенезе, секвенирование ДНК.